Wat is het doel van het primaire antilichaam in een Western-blot?
Wat is het doel van het primaire antilichaam in een Western-blot?

Video: Wat is het doel van het primaire antilichaam in een Western-blot?

Video: Wat is het doel van het primaire antilichaam in een Western-blot?
Video: Probe the Western blot for your target proteins using primary and secondary antibodies 2024, Juli-
Anonim

Met de directe detectiemethode kan een enzym- of fluorofoor-geconjugeerd primair antilichaam wordt gebruikt om het antigeen van belang te detecteren op de vlek . Bij de indirecte detectiemethode is een niet-gelabeld primair antilichaam wordt eerst gebruikt om aan het antigeen te binden.

Wat is bovendien het primaire antilichaam in Western-blot?

De primair antilichaam herkent en bindt het epitoop of de specifieke aminozuursequentie van het eiwit van belang. Ondergeschikt antistoffen gebruikt voor western blotting zijn typisch geconjugeerd met een enzym; de meest gebruikte enzymen zijn mierikswortelperoxidase (HRP) en alkalische fosfatase (AP).

Bovendien, wat doet het primaire antilichaam? Primaire antilichamen zijn immunoglobulinen die binden aan een specifiek antigeen ( eiwit , peptide, klein molecuul, enz.) van belang zijn en zijn doorgaans niet-geconjugeerd. Een goed primair antilichaam herkent en bindt met hoge affiniteit en specificiteit om het antigeen te zuiveren, op te sporen en te meten.

Wat is dus het doel van een Western-blot?

EEN western blot is een laboratoriummethode die wordt gebruikt om specifieke eiwitmoleculen te detecteren uit een mengsel van eiwitten. Vervolgens worden de eiwitmoleculen gescheiden op basis van hun grootte met behulp van een methode die gelelektroforese wordt genoemd. Na scheiding worden de eiwitten van de gel overgebracht op a blotting membraan.

Hoe worden antilichamen gebruikt bij Western-blotting?

Antilichamen zijn gebruikt om doeleiwitten te detecteren op de western blot (immunoblot). De antistoffen zijn geconjugeerd met fluorescerende of radioactieve labels of enzymen die een daaropvolgende reactie geven met een aangebracht reagens, wat leidt tot een kleuring of emissie van licht, wat detectie mogelijk maakt.

Aanbevolen: